胡凤荣 , 刘换换 , 国荣荣 , 王斐

南京林业大学风景园林学院, 南京, 210037
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2015 年, 第 13卷, 第 28 篇   doi: 10.13271/j.mpb.013.000903
收稿日期: 2014年09月22日    接受日期: 2014年10月29日    发表日期: 2014年12月20日

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为了对东方百合杂交育种获得的大量杂种后代进行分子标记早期鉴定，本研究采用单因素试验方法对模板DNA、Mg²⁺、Taq DNA聚合酶、dNTPs、引物等因子设置不同浓度梯度，建立了东方百合试管苗叶片ISSR-PCR最佳反应体系。反应体系为20 μL，内含1× PCR Buffer、模板DNA 20 ng、Mg²⁺ 2.0 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.7 U、dNTPs 0.3 mmol/L、引物0.4 μmol/L。PCR扩增程序采用Touchdown-PCR程序。利用优化后的体系对46条ISSR引物进行筛选，最终筛出3A37、3A61、UBC840、UBC841、UBC844等5条多态性高，重复性好的引物，且引物序列以二核苷酸重复序列为主。本研究可为利用ISSR分子标记开展东方百合杂种真实性鉴定提供技术方法和支持。

东方百合；试管苗；ISSR-PCR；引物筛选